Реакция Вассермана, анализ крови на сифилис

Анализ крови на сифилис – RW-методика

RW-анализ крови на сифилис, также известный, как реакция Вассермана, применяется уже более ста лет и не думает сдавать завоеванные позиции. В плане эффективности данная методика, отличающаяся крайней простотой и в то же время высоким уровнем надежности, не имеет себе равных. Все современные тесты, разработанные с целью диагностики сифилиса на ранней стадии развития болезни, в той или иной мере воспроизводят классическую реакцию Вассермана. И все же, как бы производители подобных анализаторов ни старались, полностью заменить изобретение, которое получило широкое распространение по всему миру и спасло миллионы жизней, они пока не могут, а вот дополнить исследование, подтвердить уже полученные данные им вполне под силу.

Описание методики

Что представляет собой RW-анализ?

Дело в том, что столкнувшись с подобным «врагом», организм начинает вырабатывать антитела, которые обезоруживают трепонему за счет реакции связывания комплемента (РСК). Эти антитела, образующие устойчивое соединение с возбудителем сифилиса, постоянно присутствуют в крови и спинномозговой жидкости зараженного человека, однако обнаружить их не так-то просто. Здесь и приходит на помощь реакция Вассермана.

Поэтапное описание анализа выглядит следующим образом:

1. Пациенту вводят препарат с кардиолипином с целью провоцирования РСК.
2. Следом за «провокатором» в дело вступает гемолитическая система, запускающая процесс гемолиза.
3. Сформировавшиеся комплексы нейтрализуются с помощью комплемента.

Если человек болен сифилисом, в его крови и спинномозговой жидкости сразу же после ввода «провокатора» начинают формироваться соединения «антиген-антитело», которые без проблем идентифицируются специалистами-лаборантами. Процесс прекращается тогда, когда иссякает кардиолипин, который вводят в строго ограниченном объеме. Далее в дело вступает комплемент, обезвреживающий образовавшиеся соединения. После того, как данное вещество выполнит свою задачу, специалисты, проводящие исследование, заполняют таблицу, где указывают, с какой скоростью протекала РСК и сколько комплексов образовалось за отведенный промежуток времени. Интенсивность реакции оценивается по шкале от (+) до (++++). От полученных результатов зависит, как и чем будут лечить пациента и то, сколько времени это займет.

Если человек здоров, кардиолипин нейтрализуется еще на стадии введения гемолитической системы. Ввиду отсутствия в крови и спинномозговой жидкости пациента специфических антител, введенный ранее антиген не образует комплексы, а вступает в реакцию гемолиза, вследствие чего его активность довольно быстро сходит на нет.

Катализатор реакции Вассермана, как делают RW анализ

В роли катализатора реакции Вассермана выступает препарат, в состав которого входят три вещества:

1. Антиген бледной трепонемы, получаемый путем обработки возбудителя болезни ультразвуком либо посредством многоуровневой очистки спиртового липидного экстракта, извлеченного из мышечных волокон бычьего сердца (во втором случае к антигену добавляют лецитин, фосфолипид и холестерин, призванные усилить реакцию).
2. Гемолитическая система на основе гемолитической сыворотки из крови кролика и осла, иммунизированной эритроцитами барана в возрасте от одного года до четырех лет.
3. Комплемент, изготовленный из кровяной сыворотки морских свинок.

Указанные компоненты смешиваются в равном количестве (по двадцать пять или пятьдесят миллилитров), после чего готовый препарат используют по назначению.

Как подготовиться к анализу крови RW на сифилис

Материал для исследования берется из локтевой вены в объеме, равном девяти-десяти миллилитрам. У детей в возрасте до года кровь берут из пятки, предварительно надрезав кожу и ткани в указанной области специальным скальпелем. Полученный материал направляют в лабораторию в тот же день. Если по какой-либо причине этого сделать не удалось, пробирку помещают в камеру с определенным температурным режимом, где материал хранится до следующего дня. Кровь сохраняет свои свойства в течение двух суток: по истечении указанного срока толку от нее уже не будет – придется сдавать ее повторно.

При наличии следующих обстоятельств забор крови не осуществляется:

1. повышенная температура тела;
2. критические дни;
3. период восстановления после недавно перенесенной болезни инфекционного характера;
4. предстоящие роды и послеродовый период;
5. употребление алкоголя накануне процедуры;
6. возраст ребенка менее двух недель.

При отсутствии противопоказаний забор крови осуществляется в плановом режиме. Из полученного материала изготавливают сыворотку, которую затем используют для анализа. Происходит это следующим образом:

1. Извлеченную из вены пациента кровь помещают в термостат, внутри которого поддерживается температура в 37 ºС.
2. Когда кровь загустеет (данный процесс занимает от пятнадцати минут до получаса), в дело вступает центрифуга, совершающая около тысячи оборотов в минуту.
3. Примерно через пятнадцать минут непрерывной работы центрифуги над кровяным сгустком появляется прозрачная жидкость – кровяная сыворотка – которую извлекают для дальнейших исследований. Если в сыворотке обнаруживаются эритроциты, жидкость помещают обратно в центрифугу.
4. Очищенная от эритроцитов сыворотка инактивируется при температуре 55-57 ºС (данный процесс занимает в среднем полчаса).

Инактивированную сыворотку, лишенную естественного комплемента, используют по назначению либо помещают в холодильник, где она хранится несколько дней (но не более недели).

Как проводят анализ крови на сифилис, как делают реакцию Вассермана

Исследование крови на сифилис осуществляется следующим образом:

1. Три пробирки заполняют кровяной сывороткой, разбавленной раствором натрия хлорида.
2. В первую пробирку добавляют двадцать пять миллилитров антигена, во вторую – аналогичное количество кардиолипина, в третью (контрольную) доливают раствор хлорида натрия.
3. Во все пробирки добавляют комплемент.

Чтобы результаты анализа оказались максимально точными, заранее компоненты не смешивают. Далее происходит следующее:

1. Пробирки помещают в термостат, поддерживающий температуру 36-38 ºС (первичная инкубация).
2. Через сорок-пятьдесят минут в подогретую жидкость вводят гемолитический состав в объеме, не превышающем пяти миллилитров, после чего интенсивно встряхивают пробирки.
3. Сосуды помещают обратно в термостат.

После введения гемолитической системы в пробирках начинается реакция, за которой внимательно следят специалисты-лаборанты. Окончательный вердикт выносится после сравнения полученных данных с контрольными образцами – дополнительными пробирками, одна из которых заполнена кровью, инфицированной бледной трепонемой, а другая – чистой кровью.

Исследование спинномозговой жидкости, что такое, как делают

RW-методика допускает использование вместо крови спинномозговой жидкости, которую также разливают по трем пробиркам: в первую наливают неразбавленную субстанцию, во-вторую – смешанные в равных пропорциях спинномозговой состав и раствор хлорида натрия, в третью – жидкость, разведенную раствором хлорида натрия в соотношении 1:5. Дальнейшие действия уже известны: что кровь, что спинномозговая жидкость подвергаются одним и тем же манипуляциям, которые были подробно описаны в предыдущем разделе статьи.

Расшифровка результатов анализов

Об отсутствии в крови возбудителей болезни свидетельствует реакция гемолиза, начавшаяся сразу же после введения в состав гемолитической системы. Подобный результат говорит о том, что в крови пациента нет антител к бледной трепонеме, следовательно, человек полностью здоров.

Если же реакция гемолиза началась с задержкой либо полностью отсутствует, значит, заражение все-таки произошло. В этом случае стадия болезни и степень ее проявления оцениваются, исходя из следующих показателей:

1. (+) – начальная стадия болезни (признак – незначительная задержка в реакции гемолиза);
2. (++) – легкая форма болезни (признак – слабоположительная реакция или частичная задержка гемолиза);
3. (+++) – прогрессирующая форма болезни (признак – положительная реакция или продолжительная пауза перед началом гемолиза);
4. (++++) – тяжелая (запущенная) форма болезни (признак – резко положительная реакция или полное отсутствие гемолиза).

Иногда в медицинском заключении указывается так называемая сомнительная реакция, обозначаемая в виде (+/-). Наличие подобной отметки говорит о том, что результаты анализа оказались неточными, поэтому желательно его повторить через какое-то время.

Степень погрешности, насколько точны результаты анализа на сифилис

Примерно у каждого двадцатого человека, не имеющего проблем со здоровьем, возможен ложноположительный результат, у каждого четвертого зараженного сифилисом – ложноотрицательный (обычно такое наблюдается на начальной стадии развития болезни, по мере прогрессирования недуга вероятность ошибки снижается).

В подавляющем большинстве случаев возникновение ложноположительной реакции оказывается обусловлено:

1. употреблением спиртных напитков или жирной пищи накануне или в день забора крови на анализ;
2. беременностью;
3. наличием туберкулеза или патологии соединительных тканей системного характера;
4. воспалением легких;
5. злокачественным процессом, протекающим в организме;
6. проблемами с печенью;
7. малярией;
8. наличием в организме паразитов;
9. скарлатиной;
10. высоким уровнем сахара в крови;
11. брюшным тифом;
12. лептоспирозом;
13. критическими днями.

В случае выявления одного из указанных факторов, влияющих на результаты исследования, рекомендована повторная сдача анализа. Также процедуру следует повторить тем, кто после прохождения курса лечения столкнулся с таким явлением, как синдром серорезистентного сифилиса, проявляющийся в виде отрицательной реакции Вассермана при фактическом наличии в крови антител к бледной трепонеме.

Дополнительное обследование. В случае если результаты RW-анализа оказались неточными, специалисты советуют прибегнуть к усовершенствованному аналогу реакции Вассермана – тесту RPR, дополненному трепонемными тестами РПГА. Этот вид исследования, быстро набирающий популярность, отличается довольно высокой точностью. В качестве единственно верного источника информации его рассматривать, конечно, нельзя, а вот в качестве дополнительного – не только можно, но и нужно.

Источник: womanchoise.ru